LABORATORIO

A continuación veremos algunas medidas que se deben tomar dentro de un laboratorio, que debemos hacer y que podemos encontrar dentro de un laboratorio.

BIOSEGURIDAD 

 

Es un conjunto de mecanismos y medidas preventivas con el objetivo de proteger la salud del paciente, de la comunidad y del personal de salud. 

NORMAS DE BIOSEGURIDAD

Están destinadas a reducir el riesgo por microorganismos para esto necesitaremos métodos de barrera como:

El uso de:

• Guantes
• Pantalón
• Zapatos
• Gorro
• Guantes
• Gafas protectoras
• Barbijo

¿Cuales son los riesgos a los que me expongo? 

Existen 3 que pueden ser biológicos, físicos y químicos.

Y tenemos 4 grados:

Grado 1: Producido por microorganismos que tienen poca probabilidad de producirnos enfermedad.

Grado 2: Tiene un riesgo moderado.

Grado 3: Se da por la manipulación del microorganismo el riesgo sera mayor para la persona que lo este manipulando y no para la comunidad.

Grado 4: De la misma forma se da por la manipulación de microorganismos pero es riesgo es elevado tanto para la persona que lo manipula como para la comunidad.

También existen niveles de bioseguridad, y son 4:

NIVEL DE BIOSEGURIDAD 1 

Se usa para la enseñanza, como por ejemplos en los colegios, ya que no representa ninguna amenaza para la salud humana, y no requiere tantas precauciones.

Las recomendaciones que se les da es el lavado de manos al salir del laboratorio, no comer, no beber, no fumar, el uso de bata, barbijo, el uso de pantalón (no rasgado).

 

Laboratorio con nivel de seguridad tipo 1

NIVEL DE BIOSEGURIDAD 2 

Se usa en hospitales para servicios de atención primaria, diagnostico e investigación,  universidades, el riesgo es moderado

Tiene que contar con señales de advertencia(de peligro biológico) y manuales de bioseguridad, ademas que esta prohibido el uso de celulares, alimentos y consumo de los mismos, manejo adecuado de objetos punzocortantes, lavado de manos antes de salir del laboratorio, no usar maquillaje ya que este puede contaminar el área.

 

Laboratorio con nivel de seguridad tipo 2

NIVEL DE BIOSEGURIDAD 3

Es un laboratorio de diagnostico especializado.

Se usa para la investigación, el acceso es limitado y controlado.

Las ventanas deben estar cerradas herméticamente, y este tipo de laboratorio cuenta con una presión de aire negativo, ademas que esta prohibido el uso de celular, consumo de alimentos, bebidas, fumar.

Laboratorio con nivel de seguridad tipo 3

NIVEL DE BIOSEGURIDAD 4 

Se usa para el estudio de microorganismos con el que no se cuente una vacuna(coronavirus, ébola), y se debe tratar todo lo que hay dentro como si fuera infeccioso, debe ser muy limpio y desinfectado.

El personal se debe cambiar de ropa y debe contar con un traje de cuerpo entero y fuente de oxigeno.

Por lo general sus instalaciones se encuentran en zonas totalmente aisladas que tienen un sistema de gestión de desechos, cuentan con ventilación especializados y complejos para prevenir que los agentes que se encuentren en este lugar se liberen en el medio ambiente. 

Laboratorio con nivel de seguridad tipo 4

 

PRINCIPIOS DE BIOSEGURIDAD 

Universalidad.- Tratar todo como infeccioso y tomar medidas de precaución.

 

Uso de barreras.- Evitar el contacto con sangre y líquidos corporales contaminados.

Medios de eliminación de material contaminado.- Procedimientos de asepsia y antisepsia.

 

Si quieres ver mas información sobre las normas de bioseguridad puedes VER ESTE VÍDEO:

 

ESTERILIZACIÓN, DESINFECCIÓN Y ANTISEPSIA 

¿Qué es esterilización? 

Es un conjunto de procedimientos que se utiliza para eliminar bacterias, micobacterias, virus, hongos y eliminar formas resistentes como esporas.Existen 2 métodos: físicos y químicos.

¿Qué es desinfección?

Es la destrucción de microorganismos que se encuentren en el ambiente, pero no tienen acción sobre formas resistentes. 

Niveles de desinfección: 

• Nivel alto, se pueden desinfectar objetos que se utilizan en procedimientos invasivos (endoscopios e instrumentos de plástico) que no resistan la presión y altas temperaturas.
• Nivel intermedio, se usa para instrumentos que no son tan invasivos como los laringoscopio y especulas.
• Nivel bajo, se usa para instrumentos no invasivos como los estetoscopios, electrodos de electrocardiograma, mango para tomar la presión, etc.

¿Qué es antisepsia?

Son los métodos que se utilizan para reducir o inhibir la contaminación de tejidos vivos(piel, mucosas).

ESTERILIZACIÓN 

MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN FÍSICOS 

Pasteurización

Proceso de calentamiento a una temperatura de 68ºC, para destruir las bacterias vivas, luego se procede a un enfriamiento brusco de 10ºC .

Pasteurización en industria alimentaria

Tindalización

Esterilizar y reducir la cantidad de bacterias en líquidos, mediante un calentamiento sucesivo a una temperatura de 80 a 100ºC para eliminar los microorganismos sin alterar la composición.

Tindalización

Vapor saturado

Es el mas utilizado, es económico, no es toxico, es confiable.

Se debe seguir los siguientes parámetros:

1. Tiempo de exposición, es de 15 minutos pero si la temperatura varia o es menor se debe aumentar el tiempo de exposición.
2. Temperatura, es de 121ºC.
3. Cantidad de la humedad, si no hay humedad adecuada se debe aumentar la temperatura.

   

   Autoclave

Calor seco

Proceso por el cual se destruyen los microorganismos por combustión o cremación, el único inconveniente es el el tiempo en el que se repone el utensilio es menor, ya que se estropean mas rápido. 

Incineración en calor seco

MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN QUÍMICOS 

Oxido de etileno 

Es una sustancia incolora, cancerígena, toxica e inflamable.

Se utiliza para esterilizar objetos sensibles como los endoscopios.

El tiempo de exposición es de 4 horas y una vez finalizado no se puede usar inmediatamente, se debe esperar 12 horas para eliminar los gases tóxicos.

 

Peroxido de hidrógeno

Se usa para la esterilización de instrumental, tal vez lo conozcas mejor como "agua oxigenada", su variación es el gas plasma que es mas eficiente y no es toxico pero es mas caro.

Ácido peracético

Se usa para la desinfección y también se ha introducido en la industria alimentaria debido a que es un compuesto inofensivo ya que no es muy toxico como los demás.

Glutaraldehído

Se usa como desinfectante frió para desinfectar y limpiar el equipo sensible al calor, incluyendo instrumental de diálisis y cirugías, se debe tener precaución ya que este puede provocar asma, irritación en la garganta, dolores de cabeza, nauseas, etc. 

 ANTISEPSIA

Antisépticos

Se utiliza para disminuir en numero de microorganismos que hay en superficies cutáneas. 

Alcoholes

No son tan tóxicos, resecan la superficie cutánea en donde actúan, tienen acción rápida. Actúan bien pero no contra las formas resistentes(esporas). 

Yodoforos

Son ligeramente mas tóxicos  que el alcohol, no actúan sobre las formas resistentes de microorganismos.

 Clorhexidina

No es muy toxico, es de lenta acción.

 Paraclorometoxilenol

Se utilizan para bacterias gram (+), y para el lavado de manos.

 

Triclosán 

Se usa contra bacterias, este lo podemos encontrar en jabones, desodorantes y dentífricos.

 

MICROSCOPIA Y CULTIVO IN VITRO

 

MICROSCOPIO 

Es una herramienta que permite observar que son demasiado pequeños para ser observados a simple vista. 

TIPOS DE MICROSCOPIO

Microscopio óptico 

 Los componentes básicos de los microscopios ópticos son una fuente de luz que se utiliza para iluminar la muestra colocada en una platina, un condensador para enfocar la luz en la muestra y dos sistemas de lentes (lente del objetivo y lente del ocular) que se utilizan para ampliar la imagen de la muestra. En la microscopia de campo claro la muestra se ve mediante transiluminación, de manera que la luz procedente del condensador atraviesa la muestra. Después se amplía la imagen, primero por la lente del objetivo y después por la lente del ocular. La ampliación total de la imagen es el producto de las ampliaciones de las lentes del objetivo y del ocular.

Habitualmente se utilizan tres lentes del objetivo diferentes:

La limitación de la microscopia de campo claro es la resolución de la imagen (es decir, la capacidad de distinguir que dos objetos están separados y que no son uno solo). La capacidad de resolución de un microscopio está determinada por la longitud de onda de la luz utilizada para iluminar el objeto y el ángulo de la luz que entra en la lente del objetivo (al que se denomina abertura numérica).  

Aunque la mayoría de las bacterias y los microorganismos de mayor tamaño se pueden ver mediante microscopia de campo claro, los índices de refracción de los microorganismos y el fondo son similares. Por tanto, los microorganismos se deben teñir con un colorante para poder observarlos, o se debe utilizar un método microscópico alternativo.

Microscopio electrónico 

En el microscopio electrónico la muestra no es iluminada con luz sino que se utilizan electrones. Los electrones impactan contra la muestra dentro de una cámara de vacío. Su principio de funcionamiento se basa en capturar los electrones dispersados u omitidos por la muestra y así poder reconstruir una imagen. La ventaja de este tipo de microscopio es que puede obtenerse un nivel de aumento muy superior al del resto de microscopios. 

Microscopio fluorescente

Los microscopios de fluorescencia son aquellos que utilizan las propiedades de fluorescencia para generar una imagen de la muestra. Este microscopio permite observar sustancias que emiten luz propia cuando son iluminadas con una longitud de onda determinada. 

Microscopio de campo oscuro 

Esta técnica de microscopía ilumina la muestra oblicuamente. De este modo los rayos de luz que llegan al objetivo no provienen directamente del foco de luz sino que han sido dispersados primero por la muestra. Esta técnica permite ver muestras que de otro modo no serían visibles debido a su transparencia. También tiene la ventaja que no requiere teñir la muestra para aumentar su contraste y poder observarla.

Microscopio de contraste de fases 

La luz viaja a distintas velocidades dependiendo del medio de propagación. Esta propiedad es utilizada en el microscopio de contraste de fases ya que la luz atraviesa la muestra con distintas velocidades en distintas secciones. Este efecto es amplificado para generar la imagen de la muestra. Mediante esta técnica no hace falta utilizar tintes y, por lo tanto, pueden observarse células vivas.

PARTES DE UN MICROSCOPIO 

• PARTE ÓPTICA

Ocular (1)

Objetivos (9)

• PARTE MECÁNICA

Tubo (11)

Platina (3)

Brazo (2)

Base o pie (6)

Pinzas (8)

Revolver (10)

Tornillo macrométrico (4)

Tornillo micrométrico (5)

• PARTE DE ILUMINACIÓN 

Condensador (7)

Diafragma 

 

MÉTODOS DE ESTUDIO

Las muestras clínicas y las suspensiones de microorganismos se pueden colocar sobre un portaobjetos de vidrio y explorar  el microscopio (estudio directo de una preparación en fresco). Aunque con este método se pueden ver microorganismos grandes (por ejemplo elementos fúngicos y parásitos) y material celular, a menudo es difícil el análisis de estructuras internas. Una muestra o un microorganismo se pueden teñir con diferentes métodos: 

Estudio directo

Los métodos de estudio directo son los más sencillos para preparar muestras para el estudio microscópico. La muestra se puede suspender en agua o suero salino (preparación en fresco), mezclada con un álcali para disolver el material de fondo(método de hidróxido potásico [KOH]) o mezclada con una combinación de un álcali y un colorante para generar contraste (por ejemplo el azul de algodón lactofenol, yodo). El colorante tiñe de manera inespecífica el material celular, lo que aumenta el contraste con el fondo y permite el estudio de las estructuras detalladas. Una variación es el método de tinta china, en el que la tinta oscurece el fondo y no la célula.

Tinciones diferenciales 

• Tinción de Gram, se usa para poder diferenciar las bacterias positivas y negativas
• Hematoxilina férrica y tricómica, se usa para la tinción de parásitos protozoarios
• Tinción de Wright Giemsa, se usa para parásitos sanguíneos (leishmaniasis)
• Tinción de Ziehl- Neelsen, es la mas antigua, durante el proceso de tinción, la muestra debe ser calentada.
• Aurominarodamina, los colorantes que se usa se tiñen fluorescente con un fondo oscuro.
• Kinyoun, es muy parecido a la tinción Ziehl- Neelsen pero no se somete a calentamiento la muestra, esta se tiñe de un fondo ligeramente azul o celeste.

CULTIVO IN VITRO

Crecimiento del cultivo bacteriano en medios selectivos; mico bacterias laboratorio

Medios de cultivo

Son preparados en los cuales van a crecer distintos microorganismos, cuenta con nutrientes que van a favorecer su crecimiento.

Tipos de medio de cultivo 

Se divide en 3 grupos:

• No selectivos enriquecidos
• Agar sangre.- Recuperación de bacterias y hongos.
• Agar chocolate.- Recuperación de bacterias, incluidas Haemophilus y Neisseria gonorrhoeae.
• Agar Mueller-Hinton.- Medio para estudio de la susceptibilidad bacteriana ante algún fármaco.
• Caldo tioglicolato.-  Caldo enriquecido para las bacterias anaerobias.
• Agar dextrosa de Sabouraud.- Recuperación de hongos
• Selectivos y diferenciales
• Agar MacConkey.- Sirve para bacterias gram (-) pseudomonas, Escherichia Coli, enterobacterias. Diferencial para las especies que fermentan en lactosa.
• Agar sal manitol.- Selectivo para los estafilococos; diferencial para Staphylococcus aureus.
• Agar xilosa-lisina-desoxicolato.- Agar diferencial selectivo para Salmonella y Shigella en cultivos entéricos.
• Medio de Lowenstein-Jensen.- Selectivo para micobacterias.
• Agar Middlebrook.- Selectivo para micobacterias.
• CHROMagar.-  Selectivo, diferencial para las levaduras.
• Agar inhibidor de hongos filamentosos.- Selectivo para los hongos filamentosos.
• Especializados
• Agar extracto de levadura con carbón vegetal tamponado (BCYE).- Recuperación de Legionella y Nocardia.
• Agar cistina-telurito.- Recuperación de Corynebacterium diphtheriae.
• Caldo de cultivo Lim.- Recuperación de Streptococcus agalactiae.
• Agar sorbitol de MacConkey.- Recuperación de Escherichia coli. 
• Agar Regan Lowe.- Recuperación de Bordetella pertussis.
• Agar sacarosa, sales biliares, tiosulfato y citrato (TCBS).- Recuperación del género Vibrio.

MATERIALES DE LABORATORIO

• De cristal
• De plástico
• De porcelana
• De fierro

Probeta, sirve para medir volúmenes

Pipeta, sirve para medir volúmenes con precisión

Matraz aforado, sirven para medir volúmenes con precisión. Tienen un cuello largo y una base recta.

Tubos de ensayo, sirven para recolectar muestras, colocar muestras de cultivo líquidos.

Vaso de precipitados, sirven para diluir soluciones.

Matraz de fondo redondeado, sirven para diluir o contener soluciones.

Matraz de Erlenmeyer, se usa para contener o calentar muestras liquidas.

Cajas petri, se usa para realizar muestras de cultivo.

Varillas, se usan para mover o diluir la muestra.

Mechero de alcohol, se utiliza para producir una llama abierta.

Trípode, sirve para sujetar la rejilla u otro material de laboratorio que pueda llenarse con materiales peligrosos o líquidos de otro tipo.

 

Rejilla, se encarga de repartir el calor de forma uniforme cuando esta se calienta en un mechero.

Gotera, se usa para recolectar soluciones, tinturas, para el portaobjetos.

Pinzas, sirve para sujetar el portaobjetos.

Mortero, se usa para triturar distintos componentes.

Espátula, se usa para recolectar cultivos y pesarlos.

Gradillas, se usa para sostener los tubos de ensayo.

Si quieres ver mas información sobre los utensilios de un laboratorio puedes VER ESTE VÍDEO: